Ông Nguyễn Thành Thơi sinh ngày 17 tháng 3 năm 1934 tại Vàm Sáng, Phong Điền, tỉnh Cần Thơ. Con của ông Nguyễn Văn Đê và bà Võ Thị Lan. Là con út trong một gia đình đông anh em. Ông học xong tú tài Một. Ông kết hôn cùng bà Trần Thị Nhung vào năm 1959. Ông có tám người con, bốn nam bốn nữ.
Ông tham gia lực lượng đặc biệt Hoa Kỳ tại Cần Thơ năm 1969, và giải ngũ năm 1972. Ông vượt biên cùng với gia đình năm 1984 tới đảo Malaysia. Ông định cư tại Virginia, Hoa Kỳ năm 1984, và hành nghề thợ mộc.
Ông về hưu tại Florida năm 2005, một năm sau đó ông được làm chứng và tin Chúa. Những ngày mà ông vui vẻ nhất là nhìn thấy con cháu về nhà đông đủ, và càng vui hơn khi nghe tin từng đứa con tiếp nhận Chúa.
Tháng Năm, 2018, ông vào viện dưỡng lão vì tuổi cao. Nơi đây, ông cũng là nạn nhân của COVID-19. Nhờ sự cầu nguyện của các con cái Chúa, ông được chữa lành và về cùng gia đình. Vì tuổi cao nên ông đã về với Chúa vào lúc 3 giờ 15 phút sáng Chủ Nhật, ngày 11, tháng 10, năm 2020.